前言：2012細胞治療技術(shù)研討會將于2012年6月1日~2日在羊城廣州召開。
細胞治療作為一種新型的人類疾病治療手段，它克服了臨床常規(guī)治療的局限性，為人類疾病的治療打開了全新的思路，展示出廣闊的應(yīng)用前景。但是，細胞治療是目前最復(fù)雜的生物療法，有許多的技術(shù)難點尚未突破，特別是臨床應(yīng)用的有效性和安全性依然是目前關(guān)注和爭論的焦點。
此次研討會貫徹基礎(chǔ)研究與臨床治療密切結(jié)合的原則，將重點介紹細胞治療領(lǐng)域的研究前沿及最新技術(shù)，如: 腫瘤的樹突狀細胞（DC）治療、T細胞過繼免疫治療、干細胞移植治療、基因修飾化細胞治療、微囊化細胞移植治療等。
此外，針對行業(yè)中缺乏操作標準規(guī)范，技術(shù)及產(chǎn)品質(zhì)量控制等問題，會議將邀請相關(guān)專家就“細胞治療安全，細胞制品質(zhì)量控制，臨床治療規(guī)范化管理”等內(nèi)容進行報告并展開討論，以促進行業(yè)健康發(fā)展。
以下是本次研討會的部分嘉賓的演講摘要，更多相關(guān)資訊可關(guān)注生物谷會議官方微博（@生物谷會議），或登錄會議官網(wǎng)：2012細胞治療技術(shù)研討會
學(xué)習(xí)新版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》強化體細胞治療的質(zhì)控
去年衛(wèi)生部發(fā)布了97號令，有關(guān)新版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》(以下簡稱藥品GMP)。它是歷經(jīng)5年修訂、兩次公開征求意見而完成的。新版藥品GMP吸收了國際先進經(jīng)驗，結(jié)合我國國情，按照"
體細胞的制備與新版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》或制藥有什么關(guān)系？因為體外進行細胞培養(yǎng)（未經(jīng)培養(yǎng)的血細胞、骨髓細胞不在內(nèi)），就要使用培養(yǎng)基、細胞因子等，需要GMP凈化間，需要有標準操作程序（SOP）和產(chǎn)品的質(zhì)控，這些和制藥沒有本質(zhì)上的區(qū)別。經(jīng)過培養(yǎng)的細胞可能被活化、或改變性質(zhì)和功能,因此，終產(chǎn)品需要證明其安全性和有效性。因此，學(xué)習(xí)藥品GMP對于體細胞制劑的質(zhì)控是十分必要的。 去年年底我國衛(wèi)生部國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了衛(wèi)辦科教涵1177號"關(guān)于開展干細胞臨床研究和應(yīng)用自查自糾工作的通知"。已叫停未經(jīng)衛(wèi)生部和SFDA批準的干細胞臨床研究和應(yīng)用。這也是我國開展體細胞臨床研究的良好開端。體細胞的研究和應(yīng)用僅僅是開始，問題較多，但其發(fā)展?jié)摿艽?，尤其在腫瘤，傳染病，以及再生醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用前景廣闊。相信我國的科技工作者和管理者攜手，加速科學(xué)的體細胞臨床研究，一定會造福于百姓，并走到國際的前列。 [生物谷專訪]張叔人：整頓是干細胞療法發(fā)展的良好開端 基因修飾DC的臨床治療 樹突狀細胞（dendritic cell, DC）為一種骨髓來源的抗原提呈細胞（antigen-presenting cell, APC），它在免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)和調(diào)控中發(fā)揮重要作用，為T和B細胞免疫反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控者。DC作為免疫反應(yīng)的關(guān)鍵"決策細胞"，它是對免疫系統(tǒng)進行治療性操作以增強針對腫瘤抗原的免疫反應(yīng)的理想靶點之一。在腫瘤疫苗的研究中，DC常作為一種"天然佐劑"來誘導(dǎo)腫瘤抗原特異性效應(yīng)和記憶性細胞。自從1996年美國斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)中心Hsu等在Nature Medicine上報道了全球首項DC腫瘤疫苗臨床研究以來，基于DC的腫瘤免疫治療方法一直處于研究中，一系列臨床研究正在進行中或已經(jīng)完成。目前全球范圍內(nèi)已經(jīng)有3支DC腫瘤疫苗獲得了上市批準：sipuleucel-T（Dendreon，美國）、CreaVaxRCC（CreaGene，韓國）和Hybricell（Genoa Biotechnologia，巴西），DC腫瘤疫苗已經(jīng)由實驗室走上臨床，其可行性和安全性以及對部分患者的有效性已經(jīng)得以證實，但從總體上來看，DC腫瘤疫苗誘導(dǎo)的臨床反應(yīng)仍有限，受制于DC的成熟度、與臨床反應(yīng)相關(guān)的細胞免疫反應(yīng)的誘導(dǎo)、外源性負載的表位數(shù)量較少等因素，這表明傳統(tǒng)DC腫瘤疫苗功能可能需要進一步改進，而基因修飾的表達腫瘤抗原和增強免疫反應(yīng)的免疫刺激分子、細胞因子或趨化因子以及下調(diào)免疫負調(diào)控分子（如SOCS1等）的DC將有助于這些問題的解決。10多年的臨床前研究和臨床研究已經(jīng)證實單純基因修飾DC治療或它與其他治療手段聯(lián)合治療的安全性和有效性，它將是未來DC腫瘤疫苗發(fā)展的一個重要方向，尤其是應(yīng)用于常規(guī)治療手段后的微小殘留病灶的輔助治療或與其他抗腫瘤或免疫增強治療手段的聯(lián)合治療。 體細胞免疫治療及聯(lián)合腫瘤常規(guī)治療的基本原則 體細胞免疫治療指向腫瘤患者輸入具有抗腫瘤活性的免疫細胞，直接殺傷腫瘤細胞或激發(fā)機體抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而達到治療腫瘤的目的。常用的體細胞免疫治療方法包括：樹突狀細胞疫苗（DC ）、細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞 （CIK）、DC刺激的CIK細胞（DC-CIK）、半合子DC刺激的CIK細胞（半合子DC-CIK）及自然殺傷細胞（NK）等。DC是已知機體內(nèi)抗原呈遞能力最強的細胞，通過對腫瘤抗原的攝取及抗原提呈，可有效地誘導(dǎo)及活化免疫效應(yīng)細胞，從而介導(dǎo)強大的特異性腫瘤免疫。CIK細胞是將人的外周血單個核細胞在體外用多種細胞因子共同培養(yǎng)一段時間后獲得的一群異質(zhì)細胞，又被稱為NK細胞樣T淋巴細胞，兼具有T淋巴細胞強大的抗腫瘤活性和NK細胞的非MHC限制性殺瘤優(yōu)點。DC-CIK指通過體外誘導(dǎo)有功能的自體DC細胞，將這種有功能的自體DC細胞激活自體CIK< /SPAN>細胞，產(chǎn)生一種更強的抗腫瘤的效應(yīng)細胞，從而發(fā)揮其抗腫瘤作用。NK細胞來源于造血細胞，它們不依賴抗原刺激作用，就可以直接殺傷腫瘤細胞和病毒感染的細胞，因此，在機體免疫監(jiān)視和早期抗感染免疫過程中起重要作用。半合子DC-CIK 指從患者體內(nèi)分離培養(yǎng)CIK細胞，再從患者子女體內(nèi)分離培養(yǎng)DC，兩者混合后回輸給患者。體細胞免疫治療聯(lián)合腫瘤常規(guī)治療的基本原則是根據(jù)不同腫瘤的生物學(xué)特性、患者的遺傳背景、目前的病情狀況、前期治療方法、年齡等，在傳統(tǒng)腫瘤治療模式的基礎(chǔ)上，制定出適合病人的個體化體細胞免疫治療方案。體細胞免疫治療可以作為綜合治療的一部分, 在腫瘤負荷降低后接受治療；還可聯(lián)合細胞因子、抗腫瘤抗體、生物靶向藥物以取得更好的療效。 腫瘤的細胞免疫治療：現(xiàn)狀和未來 美國FDA于2008年12月，我國衛(wèi)生部也于2009年5月正式批準DC誘導(dǎo)的細胞免疫治療應(yīng)用于臨床。2011年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎頒發(fā)給了DC以及DC誘導(dǎo)腫瘤免疫的發(fā)現(xiàn)者，蒙特利爾大學(xué)的Ralph M. Steinman教授，以表彰他在腫瘤免疫治療領(lǐng)域的巨大貢獻。美國NIH預(yù)言，細胞治療可能會成為"能夠徹底治愈腫瘤的唯一手段"。隨著DC誘導(dǎo)的細胞免疫治療的基礎(chǔ)、臨床前、和臨床研究的快速發(fā)展，細胞免疫治療已經(jīng)成為繼手術(shù)，放療、化療之后的第四大腫瘤治療模式。美國NIH報告應(yīng)用TIL對惡黑進行治療，總體有效率高達72%，令世界廣泛關(guān)注。國內(nèi)各大中型三甲醫(yī)院多已開展DC-CIK細胞免疫治療，并獲得明顯高于化療的臨床有效率（大約40%～45%）。 以美國NIH的Rosenberg教授為代表的TIL細胞免疫治療，采用了細胞回輸前預(yù)處理（preconditioning）和大劑量IL-2的應(yīng)用，使臨床療效大幅度提高，但不同的預(yù)處理方法，特別是大劑量IL-2的應(yīng)用，帶來了不同程度的副反應(yīng)。我國大多應(yīng)用DC-CIK方法，但存在效應(yīng)細胞在體內(nèi)存留時間短、免疫一過性、客觀有效率低等臨床問題。有研究探討應(yīng)用腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)染特定基因至DC，激活制備特定的抗原特異性CTL，過繼回輸治療該特定抗原高表達的腫瘤，雖然特異性增強，但腫瘤譜縮窄。有研究探討臍血來源的DC和T細胞，擴增和制備DC-CIK進行臨床治療，但行政準入尚未完善。也有研究探討轉(zhuǎn)染抗原特異性TCR，或輕鏈和重鏈抗原嵌合體受體（CAR）至T細胞，獲得了12%～30%的有效率。但無論何種方法制備的效應(yīng)細胞，過繼回輸后都會面臨同樣的問題：腫瘤微環(huán)境的免疫抑制因素，使過繼回輸?shù)男?yīng)細胞在體內(nèi)存留時間短、免疫呈一過性，免疫記憶細胞難以發(fā)揮持續(xù)的免疫激活，最終導(dǎo)致臨床療效有限，以及預(yù)處理和輔助用藥帶來的副反應(yīng)等，仍是目前困擾臨床的主要問題。 我們的臨床經(jīng)驗表明，根治手術(shù)后非帶瘤狀態(tài)患者，以防止復(fù)發(fā)、爭取根治為治療目標，術(shù)后盡早實施2～3個療程的細胞免疫治療，然后進行1～2個療程的系統(tǒng)化療，使復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率顯著降低。帶瘤狀態(tài)的晚期腫瘤患者，以控制腫瘤進程、改善生存質(zhì)量、延長生存期為治療目標，應(yīng)采取綜合治療理念，在保證生存質(zhì)量的前提下，首先應(yīng)用腫瘤微創(chuàng)治療技術(shù)減低腫瘤負荷，然后實施細胞免疫治療。我們的理念是"干擾腫瘤微環(huán)境、打破腫瘤免疫耐受基礎(chǔ)上的個體化、特異性細胞免疫治療"，能夠有效的提高客觀有效率和總體有效率。 今后的挑戰(zhàn)在于：如何選用初始T細胞制備效應(yīng)細胞，如何選用特定的T細胞亞群制備效應(yīng)細胞，單克隆抗體聯(lián)合細胞過繼回輸治療的探討，新型基因工程載體的研發(fā)和應(yīng)用，輔助用藥的改良，以及如何減低臨床副反應(yīng)等。 IL-15選擇性轉(zhuǎn)染特異性CD4+T細胞過繼轉(zhuǎn)移治療腫瘤 數(shù)十年來，腫瘤治療取得了較大的進展，但仍然面臨困境：手術(shù)治療對微小癌灶、轉(zhuǎn)移癌灶束手無策；放化療對正常細胞和癌細胞區(qū)分不夠，毒副作用較大。因此，靶向性強、副作用小的免疫療法受到人們的廣泛關(guān)注。越來越多的研究表明：CD4+T細胞可發(fā)揮重要的抗腫瘤免疫作用，其應(yīng)用于過繼轉(zhuǎn)移治療腫瘤的前景也為人們所看好。但是，受困于無法短時間內(nèi)獲得大量腫瘤特異性細胞，CD4+T細胞過繼轉(zhuǎn)移應(yīng)用于臨床腫瘤治療受到限制。大量擴增腫瘤特異性CD4+T細胞意義重大。 我們開展了IL-15基因體外轉(zhuǎn)染CD4+T細胞后過繼轉(zhuǎn)移治療腫瘤的研究，具體包括以下三個方面的工作：構(gòu)建pTK-IL15逆轉(zhuǎn)錄病毒載體并成功轉(zhuǎn)染CD4+T細胞，該載體攜帶人IL-15基因以及自殺基因胸苷嘧啶激酶（TK）；測試IL-15轉(zhuǎn)染抗原特異性CD4+T細胞的效率；通過動物模型檢測了該療法抑制腫瘤生長的效果。實驗結(jié)果顯示：在體外T細胞培養(yǎng)過程中，IL-15轉(zhuǎn)染可選擇性擴增抗原特異性CD4+T細胞。其作用機制如下：抗原特異性CD4+T細胞在體外抗原刺激作用下，處于增殖活躍狀態(tài)，更易被逆轉(zhuǎn)錄病毒所轉(zhuǎn)染，實現(xiàn)了IL-15對抗原特異性CD4+T細胞的選擇性轉(zhuǎn)染；IL-15轉(zhuǎn)染后降低CD4+T細胞FasL表達水平，阻斷Fas/FasL介導(dǎo)的T細胞凋亡，加強特異性CD4+T細胞的存活。通過動物模型我們進一步證實了轉(zhuǎn)染IL-15的CD4+T細胞可在荷瘤小鼠體內(nèi)抵抗凋亡，與IL-15細胞因子體外培養(yǎng)的CD4+T細胞相比具有更好地抑瘤效應(yīng)。通過構(gòu)建TK基因于逆轉(zhuǎn)錄病毒載體上，實現(xiàn)了GCV對基因轉(zhuǎn)染CD4+T細胞的選擇性有效清除，從而確保了本療法的安全性。 我們的研究結(jié)果第一次證實轉(zhuǎn)染IL-15的抗原特異性CD4+T細胞在體外具有增殖優(yōu)勢，在體內(nèi)可有效抑制腫瘤生長。上述研究成果將推動CD4+T細胞過繼轉(zhuǎn)移在臨床腫瘤治療中的應(yīng)用。 主辦：中國醫(yī)師協(xié)會 承辦：生物谷 合作單位：廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院
